根據典型病史，受累骨骼肌極易疲勞，經休息和服用抗膽堿酯酶藥物后有所好轉可予診斷。不典型者可作進一步診斷性試驗。
1.疲勞試驗受累肌肉重復收縮后出現(xiàn)無力。如令患者眼球上視，觀察眼瞼無力而下垂時為陽性。
2.藥物試驗
(1)新斯的明試驗：肌內注射0.5～1mg，30分鐘后癥狀好轉為陽性。
(2)依酚氯銨試驗：靜脈注射2mg，觀察20秒，如無反應則用30秒緩慢加給8mg，1分鐘內癥狀好轉者為陽性。
3.重復電刺激單纖維肌電圖低頻(3Hz)和高頻(30～50Hz)刺激尺神經或面神經，如出現(xiàn)動作電位遞減10%以上為陽性。陽性率約70%。
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